皮肤刺激/腐蚀性

皮肤刺激性的动物试验

发表于 2016-08-29 责任编辑:陈志杰
1、一次性皮肤刺激试验
皮肤刺激动物试验通常采用兔或豚鼠进行,因这两种动物的皮肤相对敏感。每次试验至少选择4只成年、健康、皮肤完好的动物,试验前24h,将兔或豚背部脊柱两侧的毛剪掉,去毛范围左右各约6-9cm2。24 h后直接涂布受试物0.5ml,然后用纱布或玻璃纸覆盖,作用时间4h。试验结束后,用温水或无刺激性溶剂洗去残留受试物。去除受试物后1 h、24 h、48h观察涂布部位的皮肤反应。如测试物为药物,则药物作用时间应根据临床使用的情况而定(EU,1998)。皮肤刺激反应的观察指标包括红斑、焦痂或水肿等,表现从无红斑形成到有紫红色斑并有结痂形成,从无水肿到水肿隆起超过1mm,按其严重程度评分,其评分标准类似于眼刺激试验的Draize评分(OECD TG 404, 2002)。
在许多研究中,人为地造成动物局部皮肤损伤(不能伤及真皮及产生出血),可用于比较受试物对完整皮肤及受损皮肤造成的刺激反应的情况,分析两者是否存在关联。
表1 皮肤刺激反应评分
皮肤反应 积分 皮肤反应 积分
红斑和结痂形成
无红斑
轻微红斑(勉强可见)
明显红斑
中度~重度红斑
严重红斑(紫红色)至轻微焦痂形成
 
0
1
2
3
4
水肿形成
无水肿
轻微水肿(勉强可见)
轻度水肿(皮肤隆起轮廓清楚)
中度水肿(皮肤隆起约1mm)
重度水肿(皮肤隆起超过1mm,范围扩大)
最高积分
 
0
1
2
3
4
 
8
 
2、重复皮肤刺激试验
7-14天内进行重复皮肤染毒试验,对检测受试物刺激性的效果比单次染毒效果好。受试物若是与皮肤长期密切接触的消费品或反复使用的产品时,重复染毒试验的优点更诱因突出。每次试验选择三组以上的动物,每组动物雌雄各5-10只,各组分别接受不同剂量的受试物进行测试,2周、3周、4周或13周内每天使用受试物涂布皮肤,对照动物用赋形剂同样处理。涂布皮肤方法具体如下:剪除动物背部的毛发,将受试物直接敷到背部皮肤,包裹和密封好后将动物放回笼内。6h后去除斑贴物,用湿布或干布轻轻地擦拭受试部位。每天观察皮肤刺激反应,按照产生的红斑和水肿评分。实验后期,收集涂布受试物的皮肤和未经涂布的皮肤标本,显微镜下观察、评估刺激反应的程度。重复刺激实验研究结果指出,化学物诱导的皮肤刺激反应可影响到机体的血液和临床化学指标,这些变化似乎与化学物对机体全身的毒性作用性能无关,但与皮肤刺激反应的程度相关。速些血液和化学指标参数的变化与皮肤刺激反应之间的关系目前还不清楚,但可能与皮肤受刺激后机体的血管和血液平衡发生了变化相关。
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